分光光度计在营养成分分析中是一种基础且应用广泛的分析工具，它基于物质对特定波长光的吸收特性（朗伯-比尔定律）进行定量或定性分析。其核心优势在于操作简便、成本较低、通量高、结果稳定可靠，特别适用于常规大批量样品分析。

便携式分光光度计

核心应用领域

蛋白质含量测定

- 常用方法：Bradford法、Lowry法、BCA法、紫外吸收法（A280）。

- 原理：这些方法并非直接测定蛋白质本身，而是通过其特异性的显色反应或特征紫外吸收来间接定量。

- Bradford法：考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后，其最大吸收峰从465nm变为595nm，通过测定595nm处的吸光度值定量。

- 紫外吸收法：利用蛋白质中酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸在280nm处的特征吸收进行快速测定，常用于纯化蛋白溶液。

碳水化合物（总糖、还原糖）测定

- 常用方法：苯酚-硫酸法（总糖）、DNS法（3,5-二硝基水杨酸法，还原糖）、蒽酮-硫酸法（总碳水化合物）。

- 原理：糖类在强酸条件下脱水生成糠醛或其衍生物，与特定试剂（如苯酚、蒽酮）发生显色反应，生成在特定波长有最大吸收的有色物质，从而进行定量。

脂肪（脂质）相关测定

- 常用方法：通常需先提取脂肪，再对其中特定成分进行分光光度分析。

- 磷脂含量：经过消化后，用钼蓝法在700nm左右测定磷含量。

- 胆固醇含量：与铁盐试剂反应生成有色化合物，在550nm左右测定。

- 过氧化值（POV）：测定脂肪氧化程度，碘量法或硫氰酸铁法常在500nm左右比色。

维生素测定

- 水溶性维生素：

维生素C（抗坏血酸）：常用2,6-二氯靛酚滴定法（有色溶液在520nm处有吸收）或磷钼酸比色法（在660-700nm测定钼蓝）。

脂溶性维生素：

- 维生素A：在325nm处有特征紫外吸收。

- β-胡萝卜素（维生素A原）：在450nm左右有强烈吸收，可直接测定。

- 维生素D、E：也可在特定紫外波长下测定，但易受干扰，常需色谱分离后测定。

矿物质与微量元素

- 常用方法：样品经灰化或消化后，金属离子与显色剂反应生成络合物。

- 铁（Fe）：邻菲啰啉法（510nm）、硫氰酸盐法（480nm）。

- 钙（Ca）：与偶氮胂III等试剂显色后测定。

- 磷（P）：钼蓝法（700nm）或钼黄法（400nm）。

- 硝酸盐/亚硝酸盐：格里斯试剂反应后在540nm测定（常用于食品检测）。

酶活性分析

许多酶促反应的底物或产物在特定波长下有吸收变化。

示例：测定超氧化物歧化酶（SOD）活性时，常用氮蓝四唑（NBT）光化还原法，在560nm处监测抑制率。

特定功能成分

- 多酚类、黄酮类：与铝盐试剂反应或在特定波长（如280nm、325nm）有特征吸收。

- 叶绿素：直接用丙酮提取，在645nm和663nm处测定，通过公式计算浓度。

优点与局限性

优点：

仪器普及，操作简单快速。

分析成本低，适合大批量样品筛查。

方法成熟，有大量国家标准和行业标准支持（如GB/T、AOAC方法）。

局限性： 

- 特异性相对较差：显色反应易受样品基质中其他成分干扰，需要严格的前处理去除干扰物。

- 灵敏度有限：对于痕量成分（

- 主要用于定量：定性分析能力较弱，难以区分结构相似的化合物。

- 通常为单一成分测定：无法像色谱技术那样同时分离分析多种成分。

分光光度计是营养成分分析实验室的重要设备之一，尤其适用于蛋白质、总糖、还原糖、特定维生素和矿物质等常规项目的快速定量分析。在现代实验室中，它常与高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）等更高端、更特异的技术互补使用：分光光度计负责高通量、常规性的初筛和定量，而色谱技术则负责复杂基质中多种成分的分离和精准测定。

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